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西方點墨法(WesternBlot)為實驗室中最常使用於分析蛋白質的實驗，利用抗體與蛋白質專一性的特質，來偵測特定蛋白質的表現情況。WesternBlot從蛋白萃取、​ ...

Western blotting | 西方點墨法常見問題

西方點墨法 (Western Blot) 為實驗室中最常使用於分析蛋白質的實驗，利用抗體與蛋白質專一性的特質，來偵測特定蛋白質的表現情況。

Western Blot 從蛋白萃取、蛋白定量、蛋白質電泳、轉漬、Blocking、抗體選用到最終ECL的選擇，每個步驟環節繁瑣，因此影響實驗結果的變因也相對的多。

ACE Biolabs以自身代工服務多年的經驗，整理出Western Blot常見的問題以及處理方式，幫助客戶解決實驗上的困擾，並且也提供Western Blot代工服務，幫您呈現完美的實驗結果。

Q1. Protein Band 不一致

1. 凝膠不均勻 : 增加凝膠時間，或是確認APS是否fresh，APS會影響凝膠速率。(ACE Biolabs C3009[1])

2. 樣品中鹽類濃度不一 : 將樣品純化去鹽，加入相同的buffer。

3. 上樣體積不一致 : 加樣前，使用RIPA or ddH2O 將樣品體積配置成相同。

4. 電泳時溫度過高 : 降低電流或是電壓，

Q2. 目標蛋白訊號弱

1. 樣品上樣不足 or 目標蛋白表現低 : 加大樣品上樣量，濃縮樣品蛋白。

2. 轉漬效率低 : 依目標蛋白大小，選擇適合的轉漬電流、時間。

3. 抗體效率不佳 : 增加抗體濃度或增加培育時間。

4. ECL失效 : 注意A、B劑不可混用，造成失效。

5. ECL作用時間不足 : 延長ECL時間作用，或是蛋白訊號較微弱，改選擇靈敏度更高的ECL。(A1041 ACEsignal Chemiluminescent Substrate - Pico[2]、A1042 ACEsignal Chemiluminescent Substrate - Femto[3])

6. 曝光時間不足 : 延長曝光時間。

Q3. 轉漬效率低

1. 轉漬過程中溫度過高 : 將transfer buffe...