乳酸脱氢酶(LDH)释放法检测NK细胞活性实验 | 合法藥品大搜索
乳酸脱氢酶(LDH)是活细胞胞浆内含酶之一。在正常情况下,不能透过细胞膜。当靶细胞受到效应细胞的攻击而损伤时,细胞膜通透性改变,LDH可释放至介质中, ...
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[1] 本实验来源第四军医大学官方网站 乳酸脱氢酶(LDH)释放法检测NK细胞活性 实验原理 乳酸脱氢酶[2](LDH[3])是活细胞胞浆内含酶之一。在正常情况下,不能透过细胞膜。当靶细胞受到效应细胞的攻击而损伤时,细胞膜通透性改变,LDH可释放至介质中,释放出来的LDH在催化乳酸生成丙酮酸的过程中,使氧化型辅酶I(NAD+)变成还原型辅酶I (NADH2),后者再通过递氢体-吩嗪二甲酯硫酸盐(PMS)还原碘硝基氯化氮唑蓝(INT)或硝基氯化四氮唑蓝(NBT)形成有色的甲簪类化合物,在490nm或570nm波长处有一高吸收峰,利用读取的OD值,经过计算即可得NK细胞活性实验步骤 1.靶细胞制备
取培养24~48h的靶细胞,洗涤3次,最后用完全RPMI-1640培养液调整细胞浓度至1×105/ml,备用。
2.效应细胞的制备
常规方法分离PBMC或小鼠脾细胞,洗涤3次,最后用完全RPMI-1640培养液调整细胞浓度至1×l07/ml。
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