Western blot条带结果分析整理 | 合法藥品大搜索
2020年6月3日—Westernblot条带结果分析整理.来自osm&bio...无结果2.无结果3.解决方案:.如果使用湿转法,则需增加转移时间。增加转移电压或电流。
Western Blot条带结果分析
未检测到任何结果出现原因:
加错了抗体,如一抗加的是小鼠抗人,二抗加的是山羊抗兔。 提取的总蛋白中压根没有目的蛋白,如用改变离子强度的方式提取膜蛋白(所以做Input很重要啊)。当然,梦想总是要有的,说不定你也可以在五车酵母上清中提到Cyt c;转移时间过短。 转移电场过弱;转移缓冲液未优化。 凝胶选择不恰当。 转膜时膜放反了(真是个小机灵鬼)。 蛋白上样量太少(小小的细微条带)。 一抗浓度过低(小小的细微条带)。 ECL发光液失效(小小的细微条带)。解决方案:
如果使用湿转法,则需增加转移时间。 增加转移电压或电流。 在转移缓冲液中加入0.01~0.05%的SDS。 将转移缓冲液中的甲醇浓度减少至5%或更少。 使用更低百分比的丙烯酰胺凝胶。 检查上样的量、抗体和反光液的量(小小的细微条带)其他原因及解决办法:
转移时间过长→减少转印时间。 转移电场过强→降低转印电压或电流。 转移缓冲液未优化→组装“三明治”之前,在转印缓冲液中平衡凝胶20分钟以降低凝胶中SDS浓度,从而避免小分子量蛋白的过度转移。将转印缓冲液中的甲醇浓度增加至40%提高其极性有助于从蛋白质中移除残留SDS。 ...西方墨點法分析(Western Blot) | 合法藥品大搜索
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