计算和评估ELISA数据 | 合法藥品大搜索
学习通过ELISA数据对实验结果进行计算和评估,包括如何处理计算结果,...继续进行ELISA染色。若使用这类样品,在分析结果时须将由标准曲线获得的浓度乘以稀释倍数。 ...
在交点处,绘制一条垂直于X轴的直线,读取相应的浓度(b)。
吸光度值落在标准曲线范围外的样品
要获得准确的结果,应先稀释这些样品,再继续进行ELISA染色。若使用这类样品,在分析结果时须将由标准曲线获得的浓度乘以稀释倍数。
计算变异系数变异系数(CV)为标准差σ与平均数µ的比值:
Cv= σ µ
这一数据即为方差占平均数的百分比,代表了结果的不一致性和不准确性。方差越大表示结果的一致性和准确性越差。有些计算机程序能够计算ELISA结果的CV值。
CV较大可由以下原因引起:
移液不准确;在使用前确保枪头在移液器上套牢,确保吸取正确的液体量 试剂溅入其他孔中 样本或试剂受细菌或真菌污染 试剂间交叉污染 酶标板各处温度不一致;确保酶标板在远离气流的恒温环境中孵育 部分孔干透;确保酶标板在孵育过程中始终处于被封盖状态 加标回收率加标回收率可判断的样品成分对抗体抗原检测的影响。例如,组织培养物上清液中所含的大量蛋白质可能会阻碍抗体结合,提高信噪比,从而导致得到的浓度低于实际值。
将已知浓度的蛋白质加至样品基质和标准稀释剂中。用同样的测定方法对加标蛋白质进行定量,并将样品基质和标准稀释剂的结果进行对比。
如果二者结果相同,那么样品基质可视为适用于测定程序。如果回收率不同,则说明样品基质中的组分会干扰分析物检测。
如果加标回收实验说明样品基质对结果有影响该怎么办?
我们推荐在样品基质中稀释标准品以得到标准曲线。样品基质对结果的一切影响也存在于标准品中,因此标准曲线和样品间的比较更为准确。我们许多的ELISA...
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